Shenzhen OK Biotech Technology Co., Ltd. (SZOB)
Categories

Flibanserin, CAS 167933-07-5

1.

Flibanserin, CAS 167933-07-5


La flibanserina, un fármaco antidepresivo potencial, reduce la 5-HT y aumenta la dopamina y la noradrenalina en el dializado de la corteza prefrontal de rata: papel de los receptores 5-HT1A.


Abstracto

Usando microdiálisis intracerebral in vivo en ratas conscientes, de movimiento libre, examinamos el efecto de flibanserina, un fármaco antidepresivo potencial con alta afinidad por los receptores 5-HT1A humanos y una afinidad 4-50 veces menor por los receptores 5-HT2A y D4, en basal concentraciones extracelulares de serotonina (5-hidroxitriptamina, 5-HT), dopamina (DA) y noradrenalina (NA) en regiones seleccionadas del cerebro de la rata.

La flibanserina a 3 y 10 mg kg-1 redujo significativamente la 5-HT extracelular en la corteza prefrontal (30 y 45%) y el rafe dorsal (35 y 44%), pero no tuvo efecto sobre la 5-HT extracelular en el hipocampo ventral. Las dosis de 3 y 10 mg kg-1 aumentaron la NA extracelular en una medida similar en la corteza prefrontal (47 y 50%). En total, 10 mg kg-1 produjeron DA extracelular en la corteza prefrontal (63%) mientras que 3 mg kg-1 no tuvieron un efecto significativo.

El pretratamiento con el antagonista selectivo del receptor 5-HT1A WAY100,635 (0,3 mg kg-1) 30 minutos antes de 10 mg kg-1 flibanserin antagonizó completamente los efectos de este último en 5-HT, DA y NA extracelulares en la corteza prefrontal. WAY100,635 por sí mismo no tuvo efecto sobre las monoaminas extracelulares corticales.

Los resultados muestran que la estimulación de los receptores 5-HT1A juega un papel importante en el efecto de la flibanserina en 5-HT, DA y NA extracelulares del cerebro.


Introducción

El sistema serotoninérgico ha estado implicado durante mucho tiempo en la depresión y en la respuesta a los fármacos antidepresivos. Entre las siete familias principales de receptores de 5-hidroxitriptamina (5-HT) conocidos hasta la fecha (Hoyer et al., 1994; Barnes & Sharp, 1999) la atención se ha centrado particularmente en el papel de los subtipos 5-HT1A y 5-HT2 en el mecanismo de acción de los medicamentos antidepresivos. Los agonistas del receptor 5-HT1A de diferentes clases químicas son activos en modelos animales predictivos de actividad antidepresiva (Cervo & Samanin, 1991; De Vry, 1995) y pueden tener efectos antidepresivos en el hombre (Stahl et al., 1992). Los antagonistas no selectivos del receptor 5-HT1A como pindolol aceleran el efecto antidepresivo de los inhibidores selectivos de la recaptación de serotonina (ISRS) (Artigas et al., 1994; Pérez et al., 1997) y se ha sugerido que el efecto antidepresivo de ambos tipos de sustancias se relaciona con la desensibilización de los autorreceptores de rap-5-HT1A con administración repetida (Blier y de Montigny, 1994; Invernizzi y otros, 1994, 1996; Rutter et al., 1994). Así, los ratones knockout del receptor 5-HT1A dan respuestas similares a antidepresivos en las pruebas de suspensión de la cola (Heisler et al., 1998) y natación forzada (Ramboz et al., 1998), dos modelos ampliamente utilizados para evaluar el potencial efecto antidepresivo de medicamentos (Porsolt et al., 1978; Steru et al., 1985).


Se observan cambios en la densidad del receptor 5-HT2 en pacientes deprimidos (Stanley y Mann, 1983; Yates et al., 1990; Risch y Nemeroff, 1992) y en respuesta a la administración crónica de fármacos antidepresivos clásicos (Peroutka y Snyder, 1980). Además, el bloqueo de los receptores 5-HT2A podría contribuir al efecto antidepresivo de mirtazapina, mianserina y nefazodona que inhiben potentemente los receptores 5-HT2A (de Boer et al., 1988) y al efecto antidepresivo de la ritanserina, un 5-HT2A Antagonista del receptor 2C (Bersani et al., 1991).


Las estrategias recientes destinadas a desarrollar nuevos fármacos antidepresivos se han centrado en compuestos que actúan como agonistas de los receptores 5-HT1A y antagonistas de los receptores 5-HT2A. Este enfoque proviene de estudios electrofisiológicos en ratas que sugieren una oposición funcional entre los receptores 5-HT2A y 5-HT1A en la corteza (Araneda y Andrade, 1991; Ashby et al., 1994), una de las regiones del cerebro donde las alteraciones metabólicas han sido consistentes informado en pacientes deprimidos (Drevets, 1998).


Flibanserin es un fármaco antidepresivo potencial con alta afinidad por los receptores 5-HT1A humanos (Ki = 1 nm) y una menor afinidad por los receptores 5-HT2A (Ki = 49 nm) y D4 (Ki = 4-24 nm), pero una afinidad insignificante por una variedad de otros receptores de neurotransmisores y canales iónicos (Borsini et al., 2002). Los estudios in vitro mostraron que la flibanserina reducía la formación de cAMP estimulada por forskolina en células y tejidos de rata y antagonizaba la acumulación de renovación de fosfatidil inositol inducida por 5-HT en la corteza del ratón (Borsini et al., 1995). Esto sugirió que el fármaco puede ser un agonista del receptor 5-HT1A y un antagonista del receptor 5-HT2A. In vivo, flibanserin mostró algunos efectos compatibles con la activación de los receptores 5-HT1A. La flibanserina inhibió la velocidad de activación de las neuronas serotonérgicas del rafe dorsal (DR) (Rueter et al., 1998) y este efecto fue antagonizado por el antagonista selectivo del receptor 5-HT1A WAY100.635 (Forster et al., 1995). Similar a los agonistas selectivos del receptor 5-HT1A, la flibanserina redujo la acumulación de 5-hidroxitriptófano cerebral inducida por el bloqueo de la descarboxilasa de aminoácidos aromáticos (ED50 = 8 mg kg-1, Brambilla et al., 1999). El hecho de que la flibanserina redujo los hemogramas (ED50 = 4.1 mg kg-1) en ratones y los efectos electrofisiológicos inducidos por el agonista no selectivo 5-HT2A 2,5-dimetoxi-4-yodoanfetamina (DOI) en ratas (Rueter & Blier, 1999, Borsini et al., 2002) sugiere que este compuesto puede bloquear los receptores 5-HT2A in vivo.


En el presente estudio, empleamos la técnica de microdiálisis en ratas conscientes para investigar el efecto de 3 y 10 mg kg-1 de flibanserina en la concentración extracelular de 5-HT en diversas regiones cerebrales. Estas dosis están en el rango de aquellas que inhiben la síntesis de 5-HT cerebral y antagonizan el efecto de DOI (Brambilla et al., 1999; Borsini et al., 2002). Dado que los agonistas del receptor 5-HT1A estimulan la actividad de las células noradrenérgicas del locus coeruleus (Szabo y Blier, 2001) y las neuronas dopaminérgicas del área ventrogésica (Arborelius y cols., 1993a; Prisco y cols., 1994) y aumentan la noradrenalina extracelular (NA) y dopamina (DA) en las respectivas regiones de proyección (Arborelius et al., 1993b, Wedzony et al., 1996), investigamos el efecto de la flibanserina sobre DA y NA extracelular en la corteza prefrontal. Finalmente, para demostrar la participación de los receptores 5-HT1A, en un experimento se estudió el efecto de la flibanserina sobre la liberación de monoamina cortical en ratas pretratadas con el antagonista selectivo del receptor 5-HT1A WAY100,635. Parte de estos resultados ha sido publicado en forma preliminar (Borsini et al., 2002).


Métodos

Animales


Se usaron ratas macho Sprague-Dawley (CD-COBS, Charles River, Italia) (250-350 g), alojadas a temperatura constante (21 ± 1 ° C) y humedad relativa (60 ± 5%) bajo una luz regular-oscuridad horario (luz 7: 00-19: 00 h) con comida y agua disponible gratuitamente.


Los procedimientos que involucran animales y su cuidado se llevaron a cabo de conformidad con los lineamientos institucionales que cumplen con las leyes nacionales (DL n. 116, GU, supl. 40, 18 de febrero de 1992, Circolare n. ° 8, GU, 14 Luglio 1994) y internacionales. y políticas (Directiva 86/609 del Consejo de la CEE, DO L 358.1 de 12 de diciembre de 1987; Guía para el cuidado y uso de animales de laboratorio, Consejo Nacional de Investigación de EE. UU., 1996).


Procedimiento de diálisis


Las ratas se anestesiaron con 3,5 ml kg-1. Equithesin y colocado en un aparato estereotáxico (David Kopf Instruments, Tujunga, CA, EUA). Se perforó un orificio en el hueso parietal o frontal y se realizó una pequeña incisión en la duramadre con una punta de aguja doblada. La sonda se perfundió con líquido cefalorraquídeo artificial (aCSF, ver más abajo para la composición) y se bajó lentamente a la corteza prefrontal de rata, hipocampo ventral y núcleo DR, luego se fijó verticalmente al cráneo con dos o tres tornillos de anclaje de acero inoxidable y cemento acrílico. Las coordenadas estereotáxicas relativas a la punta de la sonda fueron las siguientes (en mm): corteza prefrontal, AP = 12.7, L = ± 0.6 y V = 4.6; hipocampo ventral, AP = 4.2, L = ± 4.8 y V = 1.6; DR, AP = 1.1, L = ± 0.6 y V = 3.0 con un ángulo de 8 ° con respecto al plano sagital. Las coordenadas se tomaron de la línea interaural según el atlas de Paxinos y Watson (1986).


Las sondas de diálisis eran del tipo concéntrico y se prepararon esencialmente como se describe por Robinson & Whishaw (1988), excepto que la membrana de diálisis estaba hecha de poliacrilonitrilo-metalilsulfonato de sodio (AN69, Hospal). Dado que la difusión de 5-HT a través de la membrana AN69 está marcadamente retrasada (Tao y Hjorth, 1992), utilizamos membranas de Cuprophan (216 μm de diámetro exterior, Sorin Biomedica, Italia) para la medición de 5-HT. La longitud de la membrana expuesta fue de 4 mm para la corteza prefrontal y el hipocampo ventral y de 1,5 mm para la DR. La recuperación in vitro fue aproximadamente 8 y 20% respectivamente para membranas de Cuprophan de 1,5 y 4 mm y 22-29% para membranas AN69 de 4 mm. Cada rata fue implantada con una sola sonda en el DR o hipocampo ventral. Se implantaron sondas bilaterales en las cortezas prefrontales para permitir la detección de cambios en 5-HT extracelular y DA o NA en el mismo sujeto.


Se dejó que las ratas se recuperaran de la anestesia, una por jaula con acceso libre a comida y agua. Aproximadamente 24 h después de la cirugía, cada rata se colocó en una jaula y la cánula de entrada se conectó mediante un tubo de polietileno a una jeringa de 2,5 ml que contenía CSF (composición en mm: 145 NaCl, 3 KCl, 1,26 CaCl2 · 2 H2O, 1 MgCl2 · 6 H2O en agua destilada y tamponada a pH 7,4 con tampón de fosfato de sodio 2 mm) que contiene 1 μm de citalopram para mejorar la detectabilidad de 5-HT. Cada sonda se perfundió a un caudal constante de 1 μl min-1 con una bomba de microinfusión (CMA 100, CMA / Microdialysis, Estocolmo, Suecia). Después de un período de lavado de 30 minutos, se recogieron muestras de perfundido consecutivas de 30 min en miniviales. Las muestras se inyectaron inmediatamente en el cromatógrafo líquido de alto rendimiento con detección electroquímica (HPLC-ED) sin purificación previa para la determinación de monoaminas como se describió previamente (Invernizzi et al., 1992a, 1992b). Se determinaron 5-HT, NA y DA en muestras separadas de dializado. La separación de 5-HT se logró mediante una columna de fase inversa (Supelcosil LC18-DB 3 μm, 150 × 4,6 mm; Supelchem, Italia) y una fase móvil que consta de (mm) ácido cítrico 9, acetato de sodio trihidrato 48, Na2EDTA 0,1 , 100 μl l-1 trietilamina y 40 ml l-1 acetonitrilo, bombeados a 1 ml min-1. La separación de NA se obtuvo usando una columna de fase inversa (Hypersil-ODS 5 μm, 125x3,1 mm, Bischoff, Italia). La fase móvil, que consiste en (mm) de ácido cítrico 25, acetato de sodio 24, octil sulfato de sodio 1.55 y 80 ml de 1-CH3OH se bombeó a 1 ml min-1. DA se separó a través de una columna de fase inversa 150 × 4.6 (Supelcosil LC18-DB 3 μm, 150 × 4.6 mm; Supelchem, Milán, Italia) utilizando una fase móvil que contiene 0.1 m de acetato de sodio, 60 ml l-1 CH3OH, pH 4.2 con ácido acético, bombea a 1 ml min-1. Se midieron 5-HT, NA y DA mediante un detector electroquímico Coulochem II equipado con una celda analítica 5011 con los siguientes potenciales (E1 / E2): 5-HT 50/180 mV, NA 200 / -250 mV y DA 300 / - 325 mV. Las monoaminas se leyeron como la segunda señal de salida del electrodo.


Procedimiento histológico


Al final de los experimentos, las ratas se anestesiaron profundamente con hidrato de cloral (400 mg kg-1) y se sacrificaron por decapitación, se extrajeron sus cerebros inmediatamente y se verificó la colocación correcta de las sondas examinando las pistas de la sonda. Solo las ratas con la colocación correcta de la sonda se consideraron en los resultados.


Tratamiento de drogas


Flibanserin (anteriormente BIMT17; 1- [2- [4- (3-trifluorometilfenil) piperazin-1-il] etil] benzimidazol- [1H] -2-ona) (Boehringer-Ingelheim, Milán, Italia) se disolvió en una vehículo que contiene 250 ml l-1 de polietilenglicol-400 y 22,7 ml l-1. 1 m HCl, calentado a aproximadamente 40 ° C. El día del experimento (24 h después de la implantación de la sonda), una vez que los niveles basales de monoaminas en el dializado fueron estables (no más del 15% de diferencia entre tres muestras consecutivas), las ratas se inyectaron intraperitonealmente con vehículo (2 ml kg-1) o 3 y 10 mg kg-1 de flibanserina (como base). Se disolvió WAY100,635 (N- [2- [metoxifenil) -1-piperazinil] etil] -N- (2-piridinil) ciclohexano carboxamida trihidrocloruro (Pharmacia, Nerviano, Italia) en solución salina y se inyectó por vía subcutánea 30 min antes de la flibanserina o vehículo.


análisis estadístico


Los efectos de flibanserina sobre 5-HT extracelular, NA y DA se analizaron mediante ANOVA para medidas repetidas (parcelas divididas) con el tratamiento y el tiempo como factores entre y dentro de los factores, respectivamente. Las comparaciones post-hoc fueron hechas por la prueba de Tukey-Kramer. Los valores perdidos debido a problemas ocasionales en la recolección o el análisis de muestras fueron reemplazados por la media de las muestras inmediatamente antes y después. El análisis estadístico se realizó utilizando el paquete estadístico StatView 5.0 para computadora Apple-Macintosh (SAS Institute Inc., SAS Campus Drive, Cary, NC, EE. UU.).


Resultados

Efecto de flibanserin en 5-HT extracelular en la corteza prefrontal, hipocampo ventral y rafe dorsal


Las concentraciones basales de 5-HT extracelular (fmol 30 μl-1) medidas en presencia de 1 μm de citalopram en el medio de perfusión fueron las siguientes (media ± sem): córtex prefrontal 27,6 ± 1,3 (n = 38), hipocampo ventral 33,6 ± 3.1 (n = 19), DR 33.3 ± 4.8 (n = 16). El vehículo no tuvo ningún efecto sobre la 5-HT extracelular en la corteza prefrontal y la RD, pero aumentó significativamente la 5-HT extracelular (en un 33%) en el hipocampo ventral 30 minutos después de la inyección. En general, la flibanserina redujo significativamente la 5-HT extracelular en la corteza prefrontal (F2,16 = 4.4, P <0.03) y="" dr="" (f8,64="2.3," p=""><0.03), pero="" no="" en="" el="" hipocampo="" (f8,60="1.9," p=""> 0.06). En total, 3 y 10 mg kg-1 de flibanserina redujeron significativamente la 5-HT extracelular en la corteza prefrontal, respectivamente, 30 y 45% (Figura 1). La reducción fue máxima a los 60 minutos y duró hasta 120 minutos después de ambas dosis. El efecto de la flibanserina sobre la 5-HT extracelular en la RD fue similar al de la corteza prefrontal: 3 y 10 mg kg-1 redujeron la 5-HT extracelular en 35 y 44%, respectivamente (Figura 1). Sin embargo, el efecto fue de corta duración, siendo significativo 30 y 60 minutos después de 10 mg kg-1 y solo 30 minutos después de 3 mg kg-1.


5-HT extracelular en la corteza prefrontal (PFC), rafe dorsal (DR) e hipocampo ventral (VH) de ratas a las que se les administró 3 y 10 mg kg-1 de flibanserina o vehículo por vía intraperitoneal. Media ± sem de 5-7 ratas. Las flechas indican el tiempo de ...

Efecto de flibanserin en DA y NA extracelular en la corteza prefrontal


Las concentraciones basales de NA y DA extracelular (fmol 30 μl-1) en la corteza prefrontal en presencia de 1 μm de citalopram en el medio de perfusión (media ± sem) fueron, respectivamente, 13.8 ± 0.7 (n = 35) y 13.4 ± 0.9 (n = 36) Esta concentración de citalopram no tuvo efectos significativos sobre DA y NA extracelulares (Pozzi et al., 1999 y resultados no publicados). El vehículo no tuvo efecto sobre DA y NA extracelulares en la corteza prefrontal.


Como se muestra en la Figura 2, 10 mg kg-1 flibanserina aumentó significativamente la DA extracelular (63%) y NA (50%) en la corteza prefrontal (los valores F para DA y NA fueron F8,56 = 3.2, P <0.005 y="" f2,="" 13="9.7," p=""><> Los aumentos de DA y NA extracelulares fueron significativos de 30 a 90 minutos después de la inyección. La dosis más baja de flibanserina aumentó significativamente la NA extracelular, en un 47%, pero no tuvo efecto sobre la DA extracelular (Figura 2).


DA y NA extracelulares en la corteza prefrontal (PFC) de ratas a las que se les administran 3 y 10 mg kg-1 de flibanserina o vehículo por vía intraperitoneal. Media ± sem de 5-6 ratas. Las flechas indican la hora de la inyección del medicamento o del vehículo. Los símbolos sólidos indican ...

Efecto de WAY100,635 sobre los cambios inducidos por flibanserina de 5-HT, DA y NA extracelulares en la corteza prefrontal


En ratas a las que se administró solución salina, 10 mg kg-1 de flibanserina redujeron la 5-HT extracelular en un 47% a los 60 min (Figura 3). El pretratamiento con 0,3 mg kg-1 WAY100,635 evitó por completo esta reducción (F5,50 = 2,6, P <> Como se muestra en la Figura 4, 10 mg kg-1 flibanserina aumentó significativamente la DA extracelular (58%) y NA (60%) en la corteza prefrontal de ratas pretratadas con solución salina. WAY100,635 administrado 30 min antes de que flibanserin impidiera estos dos aumentos (DA, F5,50 = 4.8, P <0.001, na,="" f5,="" 55="3.1," p=""><0.01) (figura=""> WAY100,635 por sí mismo no tuvo efectos sobre 5-HT, DA y NA extracelulares.


Efecto de la flibanserina sola y en combinación con el antagonista selectivo del autorreceptor 5-HT1A WAY100,635 en 5-HT extracelular en la corteza prefrontal. Las ratas se pretrataron por vía subcutánea con solución salina (SAL) o 0,3 mg kg-1 WAY100,635 (MANERA; primero ...


Efecto de la flibanserina sola y en combinación con el antagonista selectivo del autorreceptor 5-HT1A WAY100,635 en DA y NA extracelulares en la corteza prefrontal. Las ratas fueron inyectadas por vía subcutánea con solución salina (SAL) o 0,3 mg kg-1 WAY100,635 (MANERA; ...


Discusión

El presente estudio muestra que la flibanserina redujo la 5-HT extracelular en la corteza prefrontal y el rafe dorsal, y elevó DA y NA extracelulares en la corteza prefrontal. El hecho de que las dosis de flibanserina que afectan las concentraciones de monoaminas extracelulares se encuentren en el rango de las activas en el estrés crónico leve y en modelos de depresión bulbectomizados en ratas (Borsini et al., 1997; D'Aquila et al., 1997) y en El modelo de ansiedad por vocalización ultrasónica (Podhorna y Brown, 2000), sugiere que la acción del fármaco sobre las monoaminas puede contribuir a estos efectos. En línea con la corta vida media de flibanserina (1-2 h) en ratas (Borsini et al., 2002), los cambios en 5-HT, DA y NA extracelular alcanzaron un máximo de 30-60 min y, excepto para cortical 5- HT, duró menos de 2 h.


El antagonista selectivo del receptor 5-HT1A WAY100.635 (Forster et al., 1995) antagonizó completamente el efecto de la flibanserina sobre la 5-HT extracelular en la corteza prefrontal. Este hallazgo es consistente con la alta afinidad del fármaco por los receptores 5-HT1A (Borsini et al., 1995) y sugiere que la reducción de 5-HT extracelular cortical por flibanserina depende de la estimulación de los receptores 5-HT1A. Los autorreceptores 5-HT1A en las neuronas 5-HT del rafe juegan un papel fundamental en la regulación de la actividad de las neuronas 5-HT, y en estudios previos WAY100,635 antagonizó la disminución inducida por flibanserina de la tasa de activación de las neuronas 5-HT de RD (Rueter et al., 1998). Estos resultados sugieren que los autoreceptores 5-HT1A de la RD están muy probablemente involucrados en el efecto del fármaco sobre la 5-HT extracelular en la corteza prefrontal. Los receptores 5-HT1A también están presentes en elementos postsinápticos en la corteza prefrontal (Pompeiano et al., 1992) y su estimulación puede reducir la actividad de las neuronas serotoninérgicas de la RD y la liberación de 5-HT en la corteza prefrontal (Ceci et al. ., 1994, Hajos et al., 1999; Celada et al., 2001). Los estudios electrofisiológicos han demostrado que la flibanserina inhibe la actividad de la neurona piramidal cortical estimulando los receptores 5-HT1A en la corteza prefrontal. La participación de los receptores 5-HT1A postsinápticos se basa en el hecho de que el efecto de la flibanserina fue anatonado por WAY100,135 y tertatolol, dos antagonistas del receptor 5-HT1A, pero no por la destrucción de neuronas que contienen 5-HT con la neurotoxina 5, 7-dihidroxitriptamina (Borsini et al., 1995). Aunque en estudios posteriores WAY100,635 no logró antagonizar el efecto inhibidor de la flibanserina sobre la actividad de las neuronas corticales (Rueter et al., 1998), un papel de los receptores 5-HT1A postsinápticos en el efecto de la flibanserina sobre la 5-HT cortical extracelular no puede ser excluido.


La flibanserina en las dos dosis analizadas redujo la 5-HT extracelular en la corteza prefrontal y la DR de ratas conscientes, pero no tuvo efecto en el hipocampo ventral. De acuerdo con este hallazgo, la flibanserina fue menos efectiva en la reducción de la síntesis de 5-HT en el hipocampo que en la corteza prefrontal (Brambilla et al., 1999). Estos hallazgos confirman los resultados de estudios previos que muestran que los agonistas selectivos del receptor 5-HT1A como 8-hidroxi-2- (di-n-propilamino) tetralina (8-OH-DPAT) redujeron preferentemente la síntesis de 5-HT y 5-HT extracelular en la corteza prefrontal con respecto al hipocampo (Invernizzi et al., 1991, 1994, 1995; Casanovas y Artigas, 1996; Casanovas et al., 1997). Debe considerarse, sin embargo, que la estimulación de los receptores 5-HT1A con dosis apropiadas del agonista redujo la 5-HT extracelular en el hipocampo ventral (Sharp et al., 1989; Kreiss y Lucki, 1994). Por lo tanto, es concebible que se hayan observado efectos similares si hubiéramos administrado flibanserina a dosis más altas.


El hallazgo de que WAY100.635 antagonizó por completo el aumento inducido por flibanserina de DA y NA extracelular en la corteza prefrontal apoya fuertemente el papel de los receptores 5-HT1A en el efecto del fármaco sobre las catecolaminas corticales. Por consiguiente, los estudios de microdiálisis han informado consistentemente que los agonistas selectivos del receptor 5-HT1A aumentan las concentraciones extracelulares de DA y NA en la corteza prefrontal (Arborelius y col., 1993b; Done & Sharp, 1994; Wedzony et al., 1996). El aumento inducido por los agonistas del receptor 5-HT1A de la DA extracelular puede ser secundario a la desinhibición de la actividad de las neuronas dopaminérgicas mesocorticales en el área ventrotegmental (VTA). En apoyo de esta hipótesis, ya se ha demostrado que tal mecanismo explica el efecto desinhibidor de 8-OH-DPAT sobre la actividad de activación de las neuronas dopaminérgicas del VTA (Prisco et al., 1994). Consistentemente, el agotamiento de 5-HT endógeno por p-clorofenilalanina atenuó el aumento inducido por 8-OH-DPAT de DA extracelular en el VTA (Chen y Reith, 1995). Por el contrario, la depleción de 5-HT no alteró el efecto de 8-OH-DPAT en la NA extracelular (Chen y Reith, 1995). La participación del mecanismo presináptico en el efecto de los agonistas del receptor 5-HT1A sobre DA extracelular no se confirmó en un estudio posterior que muestra que el aumento de DA extracelular cortical inducida por MKC-242, un agonista selectivo del receptor 5-HT1A, no se previno la lesión neurotóxica de las neuronas que contienen 5-HT con 5,7-DHT (Sakaue et al., 2000). Por lo tanto, el control ejercido por los receptores pre y postsinápticos 5-HT1A en la liberación de DA y NA sigue siendo controvertido y se necesitan más estudios para aclarar el mecanismo por el cual la flibanserina aumentó las catecolaminas extracelulares en la corteza prefrontal.


Aunque los estudios in vitro que muestran que la flibanserina tiene mayor afinidad por los receptores 5-HT1A que los receptores 5-HT2A (Borsini et al., 1995) sugieren un papel principal de los receptores 5-HT1A en el efecto de flibanserina, la flibanserina in vivo se une a 5-HT1A y receptores 5-HT2A en una extensión similar (Scandroglio et al., 2001). Por lo tanto, el bloqueo del receptor 5-HT2A puede estar implicado en los efectos de la flibanserina sobre las monoaminas corticales. No abordamos esta cuestión en el presente estudio, pero es poco probable que el bloqueo de los receptores 5-HT2A por sí mismo sea responsable de los efectos de flibanserina sobre las monoaminas corticales, ya que el bloqueo selectivo de estos receptores con M100,907 no tiene efecto sobre los receptores 5 HT, DA y NA en la corteza prefrontal (Gobert y Millan, 1999; Rollema et al., 2000; Ichikawa et al., 2001). No puede excluirse, sin embargo, que el bloqueo de los receptores 5-HT2A pueda haber contribuido al aumento de dopamina inducido por flibanserina en la corteza prefrontal ya que los estudios de microdiálisis han demostrado que la estimulación del receptor 5-HT1A y el bloqueo del receptor 5-HT2A actúan sinérgicamente para aumentar AD extracelular en la corteza prefrontal (Ichikawa et al., 2001).


Los receptores 5-HT2C ejercen un importante control inhibidor tónico de las neuronas dopaminérgicas y noradrenérgicas que inervan la corteza prefrontal y los antagonistas de estos receptores aumentan de manera constante la DA y NA extracelular en la corteza prefrontal (Gobert et al., 2000; Pozzi et al., 2002). Sin embargo, debido a la baja afinidad de la flibanserina por los receptores 5-HT2C (Borsini et al., 2002), estos receptores están poco implicados en el efecto de la flibanserina sobre las catecolaminas extracelulares.


En vista de la alta afinidad de flibanserina por los receptores D4, la interacción con estos sitios puede contribuir a algunos de los efectos observados en el presente estudio. Los estudios in vitro en células clonadas encontraron que la flibanserina se comportó como un antagonista o, aunque en concentraciones más altas, como agonista o agonista parcial en los receptores D4 (Borsini et al., 2002). Los antagonistas selectivos de los receptores D4 no tuvieron efecto sobre NA extracelular y 5-HT (Broderick y Piercey, 1998; Millan et al., 1998) en la corteza prefrontal y, aunque hay informes de que los antagonistas selectivos del receptor D4 elevan la DA extracelular en el corteza (Millan et al., 1998; Broderick y Piercey, 1998), se ha argumentado que esto ocurre a dosis superiores a las que se cree que bloquean selectivamente los receptores D4 (Millan et al., 1998). Tomados en conjunto, estos hallazgos sugieren que es poco probable que el bloqueo de los receptores D4 haya contribuido a los cambios inducidos por flibanserina en las monoaminas extracelulares en la corteza prefrontal.


En resumen, los presentes resultados muestran que la estimulación de los receptores 5-HT1A desempeña un papel importante en el efecto de flibanserina sobre 5-HT extracelular, DA y NA y sugieren que estas acciones podrían constituir una base para interpretar los efectos similares al antidepresivo del fármaco .


Expresiones de gratitud

Este trabajo fue parcialmente respaldado por Boehringer Ingelheim (Milán, Italia). Agradecemos a Pharmacia por el generoso regalo de WAY100,635 y a J. Baggott por la edición estilística.


Abreviaciones

aCSF líquido cefalorraquídeo artificial

DA dopamina

5-HT 5-hidroxitriptamina

N / A noradrenalina

ISRS inhibidores selectivos de la recaptación de serotonina


Referencias

Los receptores ARANEDA R., ANDRADE R. 5-Hydroxytryptamine2 y 5-hydroxytryptamine 1A median respuestas opuestas sobre la excitabilidad de la membrana en la corteza de asociación de rata. Neurociencia. 1991; 40: 399 - 412. [PubMed]

ARBORELIUS L., CHERGUI K., MURASE S., NOMIKOS GG, GANCHO BB, CHOUVET G., HACKSELL U., SVENSSON TH Los ligandos selectivos del receptor 5-HT1A, (R) -8-OH-DPAT y (S) - UH-301, afecta diferencialmente la actividad de las neuronas dopaminérgicas del mesencéfalo. Naunyn Schmiedebergs Arch. Pharmacol. 1993a; 347: 353 - 362. [PubMed]

ARBORELIUS L., NOMIKOS GG, HACKSELL U., SVENSSON TH (R) -8-OH-DPAT aumenta de forma preferencial la liberación de dopamina en la corteza prefrontal medial de rata. Acta. Physiol. Scand. 1993b; 148: 465-466. [PubMed]

ARTIGAS F., PEREZ V., ALVAREZ E. El pindolol induce una mejoría rápida de los pacientes deprimidos tratados con inhibidores de la recaptación de serotonina. Arco. Gen. Psiquiatría. 1994; 51: 248-251. [PubMed]

ASHBY CR, JR, EDWARDS E., WANG RY Evidencia electrofisiológica de una interacción funcional entre los receptores 5-HT1A y 5-HT2A en la corteza prefrontal medial de rata: un estudio iontoforético. Synapse 1994; 17: 173-181. [PubMed]

BARNES NM, SHARP T. Una revisión de los receptores centrales de 5-HT y su función. Neurofarmacología. 1999; 38: 1083 - 1152. [PubMed]

BERSANI G., POZZI F., MARINI S., GRISPINI A., PASINI A., CIANI N. Antagonismo del receptor 5-HT2 en el trastorno distímico: un estudio doble ciego controlado con placebo con ritanserina. Acta Psychiatr. Scand. 1991; 83: 244 - 248. [PubMed]

BLIER P., DE MONTIGNY C. Avances actuales y tendencias en el tratamiento de la depresión. Tendencias Pharmacol. Sci. 1994; 15: 220 - 226. [PubMed]

BORSINI F., CESANA R., KELLY J., LEONARD BE, McNAMARA M., RICHARDS J., SEIDEN L. BIMT 17: un antidepresivo putativo con un inicio de acción rápido. Psychopharmacology (Berl.) 1997; 134: 378 - 386. [PubMed]

BORSINI F., EVANS K., JASON K., ROHDE F., ALEXANDER B., POLLENTIER S. Farmacología de la flibanserina. CNS Drug Rev. 2002; 8: 117-142. [PubMed]

BORSINI F., GIRALDO E., MONFERINI E., ANTONINI G., PARENTI M., BIETTI G., DONETTI A. BIMT 17, un antagonista del receptor 5-HT2A y agonista completo del receptor 5-HT1A en la corteza cerebral de la rata. Naunyn Schmiedebergs Arch. Pharmacol. 1995; 352: 276 - 282. [PubMed]

BRAMBILLA A., BASCHIROTTO A., GRIPPA N., BORSINI F. Efecto de flibanserina (BIMT 17), fluoxetina, 8-OH-DPAT y buspirona en la síntesis de serotonina en cerebro de rata. EUR. Neuropsychopharmacol. 1999; 10: 63-67. [PubMed]

BRODERICK PA, PIERCEY MF Clozapina, haloperidol y el antagonista D4 PNU-101387G: efectos in vivo sobre la liberación de dopamina y serotonina mesocortical, mesolímbica y nigroestriada. J. Neural Transm. 1998; 105: 749-767. [PubMed]

CASANOVAS JM, ARTIGAS F. Efectos diferenciales de la ipsapirona sobre la liberación de 5-hidroxitriptamina en las vías neuronales de rafe dorsal y mediana. J. Neurochem. 1996; 67: 1945-1952. [PubMed]

CASANOVAS JM, LESOURD M., ARTIGAS F. El efecto de los agonistas selectivos de 5-HT1A alnespirona (S-20499) y 8-OH-DPAT sobre 5-hidroxitriptamina extracelular en diferentes regiones del cerebro de la rata. Br. J. Pharmacol. 1997; 122: 733-741. [Artículo gratuito de PMC] [PubMed]

CECI A., BASCHIROTTO A., BORSINI F. El efecto inhibidor de 8-OH-DPAT sobre la actividad de activación de las neuronas serotoninérgicas del rafe dorsal en ratas se atenúa por la lesión de la corteza frontal. Neurofarmacología. 1994; 33: 709 - 713. [PubMed]

CELADA P., PUIG MV, CASANOVAS JM, GUILLAZO G., ARTIGAS F. Control de las neuronas serotonérgicas del rafe dorsal por la corteza prefrontal medial: afectación de los receptores de serotonina-1A, GABA (A) y glutamato. J. Neurosci. 2001; 21: 9917-9929. [PubMed]

CERVO L., SAMANIN R. El efecto del tratamiento crónico con 8-OH-DPAT en la prueba de natación forzada requiere la integridad de los mecanismos serotoninérgicos presinápticos. Psicofarmacología. 1991; 103: 524-528. [PubMed]

CHEN NH, REITH ME Interacciones de monoaminas medidas por microdiálisis en el área tegmental ventral de ratas tratadas sistémicamente con (+/-) - 8-hidroxi-2- (di-n-propilamino) tetralina. J. Neurochem. 1995; 64: 1585 - 1597. [PubMed]

D'AQUILA P., MONLEON S., BORSINI F., BRAIN P., WILLNER P. Acciones anti-anhedonic del nuevo agente serotoninérgico flibanserin, un antidepresivo potencial de acción rápida. EUR. J. Pharmacol. 1997; 340: 121-132. [PubMed]

DE BOER TH, MAURA G., RAITERI M., DE VOS CJ, WIERINGA J., PINDER RM Perfiles farmacológicos neuroquímicos y autonómicos del análogo 6-aza de mianserina, Org 3770 y sus enantiómeros. Neurofarmacología. 1988; 27: 399-408. [PubMed]

Agonistas del receptor DE VRY J. 5-HT1A: desarrollos recientes y cuestiones controvertidas. Psychopharmacology (Berl.) 1995; 121: 1-26. [PubMed]

DONE CJ, SHARP T. Evidencia bioquímica para la regulación de la actividad noradrenérgica central por los receptores 5-HT1A y 5-HT2: estudios de microdiálisis en la rata despierta y anestesiada. Neurofarmacología. 1994; 33: 411 - 421. [PubMed]

DREVETS WC Estudios de neuroimagen funcional de la depresión: la anatomía de la melancolía. Annu. Rev. Med. 1998; 49: 341-361. [PubMed]

FORSTER EA, CLIFFE IA, BILL DJ, DOVER GM, JONES D., REILLY Y., FLETCHER A. Un perfil farmacológico del antagonista del receptor 5-HT1A silente selectivo, WAY-100635. EUR. J. Pharmacol. 1995; 281: 81-88. [PubMed]

GOBERT A., MILLAN MJ La activación del receptor de serotonina (5-HT) 2A aumenta los niveles de dializado de dopamina y noradrenalina, pero no de 5-HT, en la corteza frontal de las ratas que se mueven libremente. Neurofarmacología. 1999; 38: 315-317. [PubMed]

GOBERT A., RIVET JM., LEJEUNE F., NEWMAN-TANCREDI A., ADHUMEAU-AUCLAIR A., NICOLAS JP, CISTARELLI L., MELON C., MILLAN MJ Los receptores de serotonina (2C) tonicamente suprimen la actividad de la dopaminérgica mesocortical y vías adrenérgicas, pero no serotonérgicas: una diálisis combinada y un análisis electrofisiológico en la rata. Synapse 2000; 36: 205-221. [PubMed]

HAJOS M., HAJOS-KORCSOK E., SHARP T. Papel de la corteza prefrontal medial en la inhibición inducida por el receptor 5-HT1A de la actividad neuronal de 5-HT en la rata. Br. J. Pharmacol. 1999; 126: 1741 - 1750. [Artículo gratuito de PMC] [PubMed]

HEISLER LK, CHU HM, BRENNAN TJ, DANAO JA, BAJWA P., PARSONS LH, TECOTT LH Ansiedad elevada y respuestas similares a los antidepresivos en ratones mutantes del receptor 5-HT1A de la serotonina. Proc. Natl. Acad. Sci. USA 1998; 95: 15049 - 15054. [Artículo gratuito de PMC] [PubMed]

HOYER D., CLARKE DE, FOZARD JR, HARTIG PR, MARTIN GR, MYLECHARANE EJ, SAXENA PR, HUMPHREY PP Unión Internacional de clasificación Farmacológica de receptores para 5-hidroxitriptamina (Serotonina) Pharmacol. Rev. 1994; 46: 157-203. [PubMed]

ICHIKAWA J., ISHII H., BONACCORSO S., FOWLER WL, O'LAUGHLIN IA, MELTZER HY 5-HT (2A) Y D (2) bloqueo del receptor aumenta la DA cortical a través de la activación del receptor 5-HT (1A): a posible mecanismo de liberación de dopamina cortical inducida por antipsicóticos atípicos. J. Neurochem. 2001; 76: 1521 - 1531. [PubMed]

INVERNIZZI R., BELLI S., SAMANIN R. La capacidad del citalopram para aumentar las concentraciones extracelulares de serotonina en el rafe dorsal previene el efecto de la droga en la corteza frontal. Brain Res. 1992a; 584: 322-324. [PubMed]

INVERNIZZI R., BRAMANTE M., SAMANIN R. El tratamiento crónico con citalopram facilita el efecto de una dosis de provocación sobre la producción de serotonina cortical: papel de los receptores presinápticos 5-HT1A. EUR. J. Pharmacol. 1994; 260: 243 - 246. [PubMed]

INVERNIZZI R., BRAMANTE M., SAMANIN R. Concentraciones extracelulares de serotonina en el hipocampo dorsal después del tratamiento agudo y crónico con citalopram. Brain Res. 1995; 696: 62 - 66. [PubMed]

INVERNIZZI R., BRAMANTE M., SAMANIN R. Papel de los receptores 5-HT1A en los efectos de la fluoxetina crónica aguda sobre la serotonina extracelular en la corteza frontal. Pharmacol. Biochem. Behav. 1996; 54: 143-147. [PubMed]

INVERNIZZI R., CARLI M., DI CLEMENTE A., SAMANIN R. La administración de 8-hidroxi-2- (Di-n-propilamino) tetralina en los núcleos del rafe dorsal y medianus reduce la síntesis de serotonina en el cerebro de la rata: diferencias en la potencia y sensibilidad regional. J. Neurochem. 1991; 56: 243 - 247. [PubMed]

INVERNIZZI R., POZZI L., VALLEBUONA F., BONINI I., SACCHETTI G., SAMANIN R. Efecto de la amineptina en las concentraciones extracelulares regionales de dopamina y noradrenalina en el cerebro de la rata. J. Pharmacol. Exp. El r. 1992b; 262: 769-774. [PubMed]

KREISS DS, LUCKI I. Regulación diferencial de la liberación de serotonina (5-HT) en el cuerpo estriado y el hipocampo por autorreceptores 5-HT1A de los núcleos del rafe dorsal y mediano. J. Pharmacol. Exp. El r. 1994; 269: 1268-1279. [PubMed]

MILLAN MJ, NEWMAN-TANCREDI A., BROCCO M., GOBERT A., LEJEUNE F., AUDINOT V., RIVET JM, SCHREIBER R., DEKEYNE A., SPDDING M., NICOLAS JP, PEGLION JL S 18126 ([2 - [4- (2,3-dihidrobenzo [1,4] dioxin-6-il) piperazin-1-il metil] indan-2-il]), un antagonista potente, selectivo y competitivo en los receptores de dopamina D4: una comparación in vitro e in vivo con L 745,870 (3- (4- [4-clorofenil] piperazin-1-il) metil-1H-pirrolo [2, 3b] piridina) y racloprida. J. Pharmacol. Exp. El r. 1998; 287: 167-186. [PubMed]

PAXINOS G., WATSON C. El cerebro de la rata en coordenadas estereotáxicas. Sydney: Academic Press; 1986.

PEREZ V., GILABERTE I., FARIES D., ALVAREZ E., ARTIGAS F. Ensayo aleatorizado, doble ciego, controlado con placebo de pindolol en combinación con tratamiento antidepresivo con fluoxetina. Lanceta. 1997; 349: 1594-1597. [PubMed]

PEROUTKA SJ, SNYDER SH El tratamiento antidepresivo a largo plazo reduce la unión al receptor de serotonina marcada con espiroperidol. Ciencia. 1980; 210: 88-90. [PubMed]

PODHORNA J., BROWN RE La flibanserina tiene efectos ansiolíticos sin efectos secundarios locomotores en el modelo de ansiedad de la vocalización ultrasónica de rata infantil. Br. J. Pharmacol. 2000; 130: 739-746. [Artículo gratuito de PMC] [PubMed]

POMPEIANO M., PALACIOS JM, MENGOD G. Distribución y localización celular del ARNm que codifica el receptor 5-HT1A en el cerebro de la rata: correlación con la unión del receptor. J. Neurosci. 1992; 12: 440 - 453. [PubMed]

PORSOLT RD, ANTON G., BLAVET N., JALFRE M. Desesperación conductual en ratas: un nuevo modelo sensible a los tratamientos antidepresivos. EUR. J. Pharmacol. 1978; 47: 379-391. [PubMed]

POZZI L., ACCONCIA S., CEGLIA I., INVERNIZZI RW, SAMANIN R. La estimulación de los receptores 5-hidroxitriptamina 5-HT2C en el área ventrotegmental inhibe la liberación de dopamina inducida por estrés pero no basal en la corteza prefrontal de la rata. J. Neurochem. 2002; 82: 93-100. [PubMed]

POZZI L., INVERNIZZI R., GARAVAGLIA C., SAMANIN R. La fluoxetina aumenta la dopamina extracelular en la corteza prefrontal por un mecanismo no dependiente de la serotonina: una comparación con el citalopram. J. Neurochem. 1999; 73: 1051 - 1057. [PubMed]

PRISCO S., PAGANNONE S., ESPOSITO E. Interacción serotonina-dopamina en el área tegmental ventral de la rata: un estudio electrofisiológico in vivo. J. Pharmacol. Exp.Ther. 1994; 271: 83-90. [PubMed]

RAMBOZ S., OOSTING R., AMARA DA, KUNG HF, BLIER P., MENDELSOHN M., MANN JJ, BRUNNER D., HEN R. Serotonina receptor 1A knockout: un modelo animal de trastorno relacionado con la ansiedad. Proc. Natl. Acad. Sci. USA 1998; 95: 14476-14481. [Artículo gratuito de PMC] [PubMed]

RISCH SC, NEMEROFF CB Alteraciones neuroquímicas de los sistemas neuronales serotoninérgicos en la depresión. J. Clin. Psiquiatría. 1992; 53 Suppl: 3-7. [PubMed]

ROBINSON TE, WHISHAW IQ Normalización de la dopamina extracelular en el cuerpo estriado después de la recuperación de una lesión unilateral parcial de 6-OHDA de la sustancia negra: un estudio de microdiálisis en ratas de movimiento libre. Brain Res. 1988; 450: 209 - 224. [PubMed]

ROLLEMA H., LU Y., SCHMIDT AW, SPROUSE JS, la activación del receptor ZORN SH 5-HT1A contribuye a la liberación de dopamina inducida por ziprasidona en la corteza prefrontal de la rata. Biol. Psiquiatría. 2000; 48: 229-237. [PubMed]

RUETER LE, DE MONTIGNY C., BLIER P. Evaluación electrofisiológica in vivo de las propiedades agonísticas de flibanserina en receptores 5-HT1A pre y postsinápticos en el cerebro de rata. Synapse 1998; 29: 392-405. [PubMed]

RUETER LE, BLIER P. Examen electrofisiológico de los efectos de la administración sostenida de flibanserina en los receptores de serotonina en cerebro de rata. Br. J. Pharmacol. 1999; 126: 627 - 638. [Artículo gratuito de PMC] [PubMed]

RUTTER JJ, GUNDLAH C., AUERBACH SB El aumento de la serotonina extracelular producida por los inhibidores de la captación mejora después del tratamiento crónico con fluoxetina. Neurosci. Letón. 1994; 171: 183 - 186. [PubMed]

SAKAUE M., SOMBOONTHUM P., NISHIHARA B., KOYAMA Y., HASHIMOTO H., BABA A., MATSUDA T. La activación del receptor postsináptico 5-hidroxitriptamina (1A) aumenta la liberación de dopamina in vivo en la corteza prefrontal de la rata. Br. J. Pharmacol. 2000; 129: 1028 - 1034. [Artículo gratuito de PMC] [PubMed]

SCANDROGLIO A., MONFERINI E., BORSINI F. Unión ex vivo de flibanserina a receptores de serotonina 5-HT1A y 5-HT2A. Pharmacol. Res. 2001; 43: 179-183. [PubMed]

Los agonistas SHARP T., BRAMWELL SR, GRAHAME-SMITH DG 5-HT1 reducen la liberación de 5-hidroxitriptamina en el hipocampo de rata in vivo según lo determina la microdiálisis cerebral. Br. J. Pharmacol. 1989; 96: 283 - 290. [Artículo gratuito de PMC] [PubMed]

STAHL S., GASTPAR M., HESSELINK JK, TRABER J. Serotonin1A Receptors in Depression and Anxiety. New York: Raven Press; 1992.

STANLEY M., MANN JJ Increased serotonin-2 binding sites in frontal cortex of suicide victims. Lancet. 1983;1:214–216. [PubMed]

STERU L., CHERMAT R., THIERRY B., SIMON P. The tail suspension test: a new method for screening antidepressants in mice. Psychopharmacology. 1985;85:367–370. [PubMed]

SZABO ST, BLIER P. Serotonin (1A) receptor ligands act on norepinephrine neuron firing through excitatory amino acid and GABA(A) receptors: a microiontophoretic study in the rat locus coeruleus. Synapse. 2001;42:203–212. [PubMed]

TAO R., HJORTH S. Differences in the in vitro and in vivo 5-hydroxytryptamine extraction performance among three common microdialysis membranes. J. Neurochem. 1992;59:1778–1785. [PubMed]

WEDZONY K., MACKOWIAK M., FIJAL K., GOLEMBIOWSKA K. Ipsapirone enhances the dopamine outflow via 5-HT1A receptors in the rat prefrontal cortex. EUR. J. Pharmacol. 1996;305:73–78. [PubMed]

YATES M., LEAKE A., CANDY JM, FAIRBAIRN AF, McKEITH IG, FERRIER IN 5HT2 receptor changes in major depression. Biol. Psychiatry. 1990;27:489–496. [PubMed]


Etiquetas relacionadas:   flibanserin - Medicamentos, mujeres viagra, flibanserin comprar, flibanserin fda, ​​brotar flibanserin, flibanserin kaufen, flibanserin boehringer, sentia, alura, bomba coño, crema de sueños,

En contacto con nosotros
Dirección: HK: 6 / F, centro industrial Fo Tan, 26-28 Au Pui Wan St, Fo Tan, Shatin, Hong Kong Shenzhen: 8F, edificio Fuxuan, n.º 46, East Heping Rd, distrito nuevo de Longhua, Shenzhen, República Popular China
Teléfono: +852 6679 4580
 Fax:+852 6679 4580
 Correo electrónico:smile@ok-biotech.com
Shenzhen OK Biotech Technology Co., Ltd. (SZOB)
Share: